ELISA实验原理 方法 注意事项

原理

• 抗原抗体可以吸附在聚苯乙烯的塑料板子上。
• 抗原抗体的特异性结合。
• 酶类物质可以标记在抗体上。
• 酶类物质有高度的特异性和高效的催化活性。
• 底物分解为有色物质的话可以用可见分光光度计定量测量。

方法一

1. 在聚苯乙烯的板子上吸附已知的抗体A，洗涤干净。
2. 加入A抗体的特异性抗原ac，洗涤干净。
3. 加入经过酶E标记的抗体C，洗涤干净。
4. 这样在板子表面就形成了A-ac-C-E的复合物，通过酶进行特异性高效催化反应即可生成有颜色的物质。
5. 通过分光光度法得出结果。

方法二

1. 在聚苯乙烯的板子上吸附已知抗原a，洗涤干净。
2. 加入抗原a的特异性抗体AC，洗涤干净。
3. 再加入抗体AC的抗体C（加粗），C（加粗）已经被酶E标记，洗涤干净。
4. 这样在板子表面就形成了a-AC-C（加粗）-E的复合物，通过酶进行特异性高效催化反应即可生成有颜色的物质。
5. 通过分光光度法得出结果。

注意事项

1. 洗涤干净，一定要洗干净啊~！因为如果不洗干净的话，会在表面残留未被吸附的抗原/抗体，遇到下一步反应的时候会形成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物沉积是会覆盖在反应表面干扰结果的，话说三型超敏反应就是可溶性抗原抗体复合物沉积于肾小球形成的。如果恰好是最后一步加入酶你没有洗，那么恭喜你，结果跟直接酶促反应没有区别。。。。
2. 一般买空白的聚乙烯板子上是什么都木有的~按照方法1是可以随意吸附抗体A，但是抗体A一定要是单克隆抗体，用小鼠（裸鼠）一般就可以得到，比如用某人体致病原感染小鼠，得出单克隆抗体A，那么如果此致病原感染人体，人体一定会产生对于此致病原的抗体C，那么取其血清中的所有抗体全部用酶标记，按照方法1 一定会得出结果。
3. 方法2，其中抗体C（加粗）为二抗，就是抗体AC的抗体，比如乙肝病毒的核心抗原，e抗原的特异性吸附，如果人体内含有他们的抗体，那么将人体血清注入小鼠（裸鼠）得到的抗体经过酶标记，同样得出结果。
4. 如果按照方法1制备吸附有某抗体的聚苯乙烯容器，那么从方法1的第二步开始会缩短很多时间（流感病毒的H和N抗原的某一亚型单克隆抗体吸附，乙肝病毒表面抗体），同时也适用于方法2（乙肝病毒核心抗原，e抗原），可以在某疾病易感季节或者特定阶段大批制作。
5. 如若因为生物分子的不确定性导致的特异性降低，那么可向后延迟酶联抗体的结合步骤，但是同时也应该考虑复合物无用基团对结果的影响。
6. 本实验的名字叫做酶联免疫吸附试验，吸附：聚苯乙烯；免疫：抗原抗体复合物；酶联：酶标记的抗体；酶和其反应底物可以相对固定。